一、什么是冰冻切片?

冰冻切片，又称冷冻切片，是一种通过快速冷冻组织样本并在低温条件下切片的技术。与传统的石蜡切片需要数天不同，冰冻切片能在10-20分钟内完成制片，适用于术中快速病理诊断。

1. 快速冷冻：使用液氮或低温冷冻剂(如OCT化合物)使组织在短时间内凝固，减少冰晶形成，避免细胞结构破坏。

2. 低温切片：在恒冷切片机(Cryostat，通常设定在-20℃至-30℃)中切割组织，保持样本硬度，确保切片完整。

3. 快速染色：采用HE(苏木精-伊红)染色或特殊染色法，使细胞核和细胞质清晰可见，便于病理医生观察。

二、冰冻切片的操作流程

冰冻切片的制备过程高度依赖经验和技术，主要步骤如下：

1. 样本取材

外科医生将新鲜组织送至病理科，病理技师选取最具代表性的部位(如肿瘤边缘或可疑病变区)，避免坏死或出血区域。

2. 组织冷冻

直接冷冻法：小样本可直接放入恒冷切片机的冷冻台。

OCT包埋法：较大或易碎的组织需用OCT(Optimal Cutting Temperature)胶包埋，以提供支撑。

液氮速冻：某些特殊研究(如酶活性检测)需用液氮(-196℃)急速冷冻，减少冰晶损伤。

3. 切片

将冷冻的组织块固定在切片机上，调整厚度(通常4-10微米)，用防卷板平整切出薄片，贴附于玻片。

4. 固定与染色

切片经甲醇或乙醇固定后，进行快速HE染色：

苏木精(Hematoxylin)染细胞核(蓝色)

伊红(Eosin)染细胞质(粉红色)

5. 封片与阅片

滴加树脂封固剂，盖上盖玻片，由病理医生在显微镜下诊断。

三、冰冻切片的应用场景

1. 术中快速病理诊断

肿瘤良恶性判断：如乳腺癌、甲状腺癌等，决定是否扩大切除范围。

手术切缘评估：确保肿瘤完全切除(如肺癌、胃肠道肿瘤)。

淋巴结转移检测：在恶性肿瘤手术中确认淋巴结是否受累。

2. 科研与教学

免疫组化(IHC)：某些抗原在石蜡切片中可能被破坏，冰冻切片能更好保留蛋白质结构。

分子生物学研究：如荧光原位杂交(FISH)、PCR等需新鲜组织的研究。

四、冰冻切片的优势与局限性

优势

速度快：从取样到出结果仅需15-30分钟，适用于术中决策。

保留生物活性：适合酶学、免疫组化等研究。

无需脱蜡：避免石蜡切片繁琐的脱水、透明步骤。

局限性

组织形态略差：冰晶可能造成细胞空泡化，影响细节观察。

不易长期保存：石蜡切片可存档数十年，而冰冻切片通常仅短期保存。

技术要求高：切片厚度、染色质量依赖操作者经验。

冰冻切片是病理学中一项至关重要的技术，尽管存在一定局限性，但其快速、灵活的特点使其在临床和科研中不可或缺。冰冻切片为疾病诊断和治疗提供强有力的支持。